单克隆抗体的简述以及单克隆抗体制备的流程和筛选策略
单克隆抗体:由一个B细胞克隆或其杂交瘤或通过分子生物学手段克隆构建单个抗体基因转染的细胞系产生的,只能识别一种抗原表位的高度均一的蛋白抗体。
不管是制备单抗还是多抗,抗原的设计与制备都是一个非常重要的问题,设计或者制备得不好的抗原有可能完全不能免疫出抗体来。抗原的好坏决定是否能够成功制备特异性的抗体。
制备好抗原后,就要进行动物免疫了,免疫这一步除了动物自身的因素外,还要有良好的免疫计划才能得到更好的免疫效果。
恶性肿瘤是目前全世界的主要死亡原因之一,传统的放疗、化疗等治疗手段治疗效果并不理想,后期复发率很高。 随着生物技术的飞速发展以及科研人员对人体免疫系统认识的逐步深入,CAR-T细胞免疫疗法作为治疗恶性肿瘤的“第五大疗法”应运而生。该疗法没有通常放、化疗的毒副反应,也不会出现耐药性。
NK 细胞研究
血液细胞分类和细胞生物标记
NK细胞又称为自然杀伤细胞,属于大颗粒淋巴细胞,来源于骨髓,占外周血淋巴细胞的5%~15%,是重要的免疫细胞。科学家在1975年首次鉴定到了NK细胞,这类细胞能够在缺少T、B细胞的情况下直接杀伤肿瘤细胞。与具有细胞毒性的CD8+T细胞不同,NK细胞杀伤肿瘤细胞时不需要预先致敏可以直接杀伤MHC阴性的肿瘤细胞,这使得NK细胞在过继细胞免疫治疗中被广泛应用。但NK细胞在外周血淋巴细胞中所占的比例相对较低,所以有必要对种NK细胞进行体外扩增,用于研究NK细胞的功能并为细胞免疫治疗提供支持。
近年来发现其它细胞因子同样可以调节NK细胞的活性以及分化。IL-12 p70可以诱导激活,刺激细胞毒杀伤以及INFγ和TNF的产生; IL-7可以促进NK细胞分化和诱导产生细胞毒性淋巴细胞的标志蛋白;IL-18能够上调NK细胞的细胞毒性,从而提高NK细胞的杀伤活性。
将NK细胞与靶细胞(通常是K562细胞)共培养,然后通过检测靶细胞释放的酶或者用CAM、CFSE标记靶细胞,通过检测荧光,从而得出NK细胞的杀伤活性。
血液细胞分类和细胞生物标记
诺为生物提供的甲基纤维素培养基(ClonaCell-HY培养基D)将杂交瘤细胞的挑选和克隆步骤结合在一起,从而将生成单克隆抗体所需的时间减少到19天。
人 NKT/γδ Tcell markers
DC细胞亚群标志物
人DC细胞解决方案
小鼠DC细胞的Markers和相关的分选方法以及培养相关细胞因子
新型冠状病毒肺炎在各地快速蔓延,对人体最大的危害是攻击人的免疫系统,导致淋巴细胞下降,肺功能受损,危重病人甚至因为呼吸衰竭而死。同时也有很多病人因为免疫力下降,导致并发症,多器官衰竭而亡。目前无特效药可治愈新冠肺炎,在多方开发新药、新疫苗或临床试验老药新用的同时,开展NK细胞治疗提升患者免疫力是目前极为可行的治疗和预防策略。
NK细胞无需预先致敏,便可通过快速激活一系列NK激活受体来识别和裂解肿瘤细胞。此外,异体NK细胞在造血干细胞移植(HSCT)中识别和杀伤急性髓性白血病(AML)中的作用,亦促进了基于自体/异体NK细胞,甚至是基因工程改造的NK细胞(如CAR NK),应用在高危癌症患者的免疫细胞治疗的开发;目前也已在1/2期临床试验中。随着人们对NK细胞研究不断深入,基于NK细胞的免疫治疗在新的抗肿瘤治疗策略中具有重要意义。
小鼠 NK/ILC markers
小鼠 NKT/γδ Tcell markers
自然杀伤细胞(Natural Killer,NK)被视为天然免疫系统里的重要成员,具有快速产生效应细胞因子和杀死病毒感染或肿瘤细胞的能力。然而至今也愈来愈多的研究显示, 部份的NK细胞具有很强的适应环境变化能力及最终分化成生命周期长、高度功能的特殊细胞群。
DC细胞表面有如此丰富多彩的蛋白分子,充分了解DC细胞及其分子谱,才有机会充分利用DC细胞,开发治疗方法如DC疫苗等。
人 NK/ILC markers
巨核/血小板研究 目录
Other cell type markers
人的 DC 细胞Markers
人 巨核细胞/血小板 markers
人外周血单核细胞来源树突状细胞(MoDC)的制备
小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)制备方法简图
Inaba法,Son法,Lutz法
小鼠的 DC 细胞Markers
DC细胞研究 目录
人 粒细胞 markers
小鼠 粒细胞 markers
粒细胞研究 目录
人 巨噬/单核细胞 markers
小鼠 巨噬/单核细胞 markers
小鼠 巨核细胞/血小板 markers
ED克隆抗鼠抗体已经被专门设计用来识别巨噬细胞。
小鼠脾脏巨噬细胞流式细胞分析方案
巨噬/单核细胞研究 目录
T细胞产生IL-17(也称为IL-17A)是防止某些病原体所必需的。2000年一片文献研究表明IL-17A是由一群独特的T辅助细胞产生的。随后的研究明确了一群独立于Th1或Th2细胞的独特T细胞亚群,可在体外和体内分化成产生IL-17的细胞,由此建立Th17细胞作为独特的T辅助细胞谱系。在功能上,Th17细胞通过介导嗜中性粒细胞和巨噬细胞向受感染组织的募集,在抗宿主细胞病原体的宿主防御中起作用。此外,Th17细胞的异常调节可能在多种炎症和自身免疫病症的发病机制中起重要作用。
Treg细胞可以通过特异性标记CD4\CD25\CD127或者胞内转录因子FoxP3抗体(#17-4776-41)进行流式鉴定。由于FoxP3是胞内表达,因此检测时,需要进行破膜处理。Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set(#00-5523-00)专利配方设计和优化,可使用抗体对转录因子和核蛋白(例如 FoxP3 和 Ki-67)以及细胞因子和趋化因子进行核内染色。
免疫T细胞表达CD3 特异性蛋白,利用CD3抗体通过流式鉴定T细胞。
分离后的T细胞可通过CD3/CD28共刺激信号或者PHA和Con A进行激活。
T细胞是来源于骨髓,在胸腺职工分化、发育成熟的一种淋巴细胞。
T 细胞分选
CD45 CD45RO CD45RA CD45.1 CD45.2 的区别以及功能应用
人 CD8 T Cell Markers
人 CD4 T 细胞Markers
调节性T细胞(Treg)经CD3\CD28\CD2刺激活化后能够抑制应答细胞CD4+CD25-( Tresp)和CD8+ T细胞的活化和增殖。Treg一旦被活化,其免疫抑制作用即为非抗原特异性,并且这种免疫抑制性不具有MHC限制性,能够抑制同种同型或同种异型CD4+CD25-(Tresp)和CD8+T细胞的活化、增殖。除此之外,Treg还能对NK细胞的增殖、细胞因子分泌、单核/巨噬细胞、树突状细胞、B 细胞等免疫活性细胞起到抑制作用。
10色T细胞亚群抗体检测配色方案
新病原体的出现和传播是对人类健康的持续威胁。疫苗接种可以提供积极和持续的保护,但新疫苗的开发是一个缓慢的过程。虽然早期有科学家提出从超免疫血清注射多克隆免疫球蛋白来进行病毒预防和治疗,但这种方法仍然存在诸多问题。而单克隆抗体是超免疫血清的理想替代品。
如何干掉感染的传染性病毒?
细胞融合后,一旦鉴定可以产生目标抗体,就应立即进行克隆化,确保能分离出单个细胞重新形成克隆。
融合细胞后,对克隆细胞上清检测,筛选分泌抗体的杂交瘤细胞。
细胞融合指两个或者多个细胞的原生质体融合形成一个杂种细胞的过程。广义上的细胞融合可以是同种属的细胞发生,也可以是不同种属的细胞发生。
介绍制备单抗的培养基体系以及配制。
在体外培养细胞实验中,对于难养的细胞或者数量较少的细胞,常常需要预先在培养瓶或培养板底部加入一些活的原代细胞或者静息的肿瘤细胞以辅助目的细胞的生长,这就是饲养层细胞。在单抗制备过程中,刚刚融合的细胞和克隆化的细胞都比较难以生长,因此都需要添加饲养层才能较快地生长。
利用病毒表面蛋白抗原进行免疫细胞体外刺激并获取、分析抗原特异T细胞将为该病毒对免疫调节的基础研究和疫苗研发提供重要的实验方法。
小鼠 B 细胞Markers
B细胞激活与T细胞激活一样,也需要两个信号。 第一个信号由B细胞受体(BCR)提供,B细胞受体(BCR)是与其相关抗原结合的表面表达的抗体。 也可以使用抗IgM或IgD抗体模拟该信号。 第二信号通过诸如CD40和细胞因子信号传导的共刺激分子的结合来实现。 或者,细菌细胞壁的成分,例如脂多糖(LPS)和具有高度重复性分子的抗原,可能直接发出B细胞活化的信号。
人 B 细胞Markers
血液细胞分类和细胞生物标记
该应用方案中,利用Treg 扩增试剂盒,人,有效扩增 CD4+CD25+CD127dim/– Treg细胞分离试剂盒分离的Treg表达Foxp3。它包括一个Treg细胞完整的工作流程,描述从外周血单个核细胞(PBMCs)分离人Treg细胞,细胞体外扩增,以及随后的流式细胞分析。
该应用方案描述了可靠和高效的小鼠TH细胞分化的完整工作流程,从单细胞制备开始,然后分离初始CD4T细胞并体外激活和分化,通过综合细胞分析。
病毒感染常是导致免疫缺陷患者致死或致残的主要原因。动物实验及临床研究均已证实病毒特异性T细胞在控制病毒感染中的作用,因此在进行免疫重建及抗感染治疗的研究中得到广泛关注。
抗原特异性T细胞是研究免疫系统的独特工具。一但经外来病原体或肿瘤侵入活化免疫系统,抗原特异性T细胞通过自身T细胞受体 识别肿瘤抗原,具有选择性识别肿瘤抗原、分裂增殖和持续提供长期免疫保护的能力,在治疗病毒感染疾病和恶性肿瘤方面具有许多潜在的益处;因此在肿瘤免疫治疗与疫苗开发上为一重要的细胞研究方向。
单克隆抗体在医药治疗上具有广泛的前景,可用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。
免疫耐受通过主导机制(Dominant Mechanism)和退行机制(Recessive Mechanism) 实现即时的机体免疫调制。退行机制是细胞自发性的过程,令能识别并对自身引起免疫响应的细胞去除或使其失去免疫功能(anergy),亦或增加细胞表面抑制性抗体提高其激活阈等途径;主导机制,这是由特定细胞群体主动对免疫细胞激活、扩增和发挥功能进行积极抑制的过程,因此可对免疫反应的强度和持续性进行调控。
调节性T细胞(Treg)除了在外周血内存在,对免疫反应发挥抑制性调节作用之外,越来越多的研究表明,在如小肠、皮肤等多种组织内存在Treg (Tissue-resident Treg)。这些特定组织形成独特的“功能微环境”,也为身处该环境的Treg带来了组织标签。
该应用方案中,利用PanT细胞分离试剂盒直接从人PBMC中分离出Pan T细胞,然后用人T细胞活化和扩增试剂盒进行活化和扩增。 流式细胞仪在不同时间点对T细胞纯度、增殖和活化标记表达进行评估.
调节性T细胞(Regulatory T Cells, Tregs)是一类专职抑制免疫活性、维持机体免疫平衡的免疫细胞。虽然含量较低而且将Treg作为单独一类T细胞开展研究直到90年代才开始,但Treg在免疫调节中的重要性不容忽视。除针对Treg开展的基础研究,基于Treg的细胞治疗方案应用于过度免疫激活引发的组织损伤、自身免疫疾病也正成为免疫细胞治疗的热点分支。
小鼠 CD4 T Cell Markers
小鼠的 CD8 T Cell Markers
T细胞激活需要至少两个信号才能完全激活。 第一种发生在抗原主要组织相容性复合体(MHC)与T细胞抗原特异性受体(TCR)结合之后,第二种发生在随后的共刺激分子的结合之后。 最有效的T细胞共刺激剂是CD28。