T细胞相关研究

恶性肿瘤是目前全世界的主要死亡原因之一，传统的放疗、化疗等治疗手段不仅周期长、费用昂贵、过程痛苦，同时这些措施还会导致人体免疫系统功能低下，最重要的是治疗效果并不理想，后期复发率很高。

随着生物技术的飞速发展以及科研人员对人体免疫系统认识的逐步深入，CAR-T（Chimeric AntigenReceptor T-Cell Immunotherapy）细胞免疫疗法作为治疗恶性肿瘤的“第五大疗法”应运而生。其原理在于经嵌合抗原受体修饰的T细胞，可以特异性地识别肿瘤相关抗原，其效应T细胞具有高效的靶向性和杀伤活性，可克服肿瘤局部抑制免疫微环境并打破宿主免疫耐受状态。经过基因工程改造的CAR-T细胞能获得特异性识别和攻击杀伤肿瘤细胞的能力，有如“细胞导弹”，能精确“点射”靶细胞，但又不会伤及正常细胞。由于是诱导、激活自体细胞，因此该疗法没有通常放、化疗的毒副反应，也不会出现耐药性。而如何高效、快速地分选出T细胞是CAR-T免疫治疗关键的第一步。

T细胞研究流程

分离后的T细胞通过体外刺激扩增，达到需要的细胞数量用于后续研究。T细胞活化需要两个信号，第一信号是APC表面的MHC-抗原肽复合物与TCR的相互作用和结合，第二信号是微生物产物或者固有免疫针对微生物的应答成分即共刺激分子。第二信号又分为抗原依赖的(需要抗原和来自抗原提呈细胞或抗CD28抗体等的共同刺激)和不依赖于抗原的(不需要抗原而是有丝分裂原[PHA或Con A])两种。抗原依赖刺激只扩增抗原特异性的T细胞，而不依赖抗原的刺激则扩增样本培养中的所有T细胞。

在T细胞研究领域，CAR-T正成为国内医学研究的热点。CAR-T（Chimeric Antigen ReceptorT-Cell Immunotherapy，嵌合体抗原受体T细胞）免疫疗法是将嵌合抗原受体（CAR）导入到T细胞，并特异性地识别肿瘤相关抗原，使效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性较常规应用的免疫细胞大幅度提高，从而打破宿主免疫耐受状态，克服免疫逃逸，最终杀伤肿瘤细胞，具有高特异性、靶向性、MHC非限制性等特点。整个CAR-T过程需要有四步：

1）分离患者体内的免疫T细胞；

2）激活T细胞，基因改造使其表达CAR；

3）CAR-T细胞的扩增和冻存；

4）回输体内并监测。

1)T细胞激活扩增（详见T细胞激活扩增）

2)通过Lipo3000（货号 #L3000001）转染293T细胞，获得病毒颗粒；

3)病毒浓缩柱Amicon® Ultra-15 Centrifugal Filter Devices（货号 #UFC901024）与病毒浓缩液（货号 #807001）浓缩病毒，即CAR；

4)病毒颗粒（CAR）感染T细胞，使用polybrene(货号 #sc-134220)或者Vectofusion-1（货号 #130-111-163）提高感染效率，获得足够的CAR-T细胞。

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