宿主/亚型

             山羊/IgG

用法

1:5000-1:100000 (WB);1:3000-1:5000(ELISA);1:300-1:3000(IP);

依据实验优化 （IHC(P)）

WB 分析 F9 (Lane 1)和 A549 (Lane 2) alpha  Tubulin 表达。30 µg 细胞裂解物上样电泳并转膜， 5% 脱 脂 奶 粉 封 闭 后 用 Rat Anti-alpha Tubulin  (YL1/2) 单抗(1 µg/mL) 孵育，二抗 Goat anti-Rat  IgG-HRP(#GR2110)以不同稀释比例（1:10000 (Fig.  1)， 1:100000 (Fig. 2)和 1:200000 (Fig. 3)）孵育， 最后用 ECL 显色检测。

直接 ELISA 分析检测大鼠抗 FLAG Tag 单抗。 1  µg/mL 重组 N-terminal FLAG-tagged ubiquitin 蛋白 100 µL/孔包被过夜，BSA 封闭后洗涤 3 次，然后向 每孔添加 100μL 不同浓度的大鼠抗 FLAG Tag 单 抗（500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.62, 7.8, 3.9, 1.9,  0.9, 0.4 和 0 ng/mL），室温孵育 2 小时，酶标板洗 涤后每孔加入 100μL 1:10,000 稀释的 goat anti-rat  IgG-HRP (#GR2110)室温孵育 60 分钟，洗涤后加 入 100 µL/孔 TMB ELISA 底物室温显色 15 分钟， 加入 100μL ELISA 终止液终止反应，酶标仪检测。