如何获得稳定的ELISA结果？
ELISA技术 目录
酶联免疫吸附检测是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。在临床检验中 主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
原理：测定时，受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与溶液中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应结合在固相载体上，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成有色产物，产物的量与标本中要检测的目标物质的量直接相关，故可根据颜色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。
ELISA技术是特定靶标蛋白质定量的金标准，提供快速、稳定且易于分析的结果。
ELISA 可用于研究检测许多靶标，包括：
- 趋化因子
- 生长因子
- 磷酸特异性靶标
- 免疫球蛋白
- 免疫肿瘤学
- 神经生物学
无论您感兴趣的或研究领域目的靶标是什么，都有 3 种形式的ELISA试剂盒可供选择：
A、 预包被的试剂盒（Platinum ELISA (铂金ELISA)、Instant ELISA、InstantOne ELISA、High-Sensitivity ELISA（高敏ELISA））
B、含抗体对未包被试剂盒
C、或者您可以通过自己筛查来开发自己的ELISA抗体对，创建自定义的ELISA。
如何获得稳定一致的ELISA结果？
传统ELISA实验流程较多，影响ELISA结果的变量比较多，有时很难确定如何在每次实验中都能获得一致的结果。在此，我们总结了 5 个方面优化方案，用于在运行 ELISA 时确保获得稳定且准确的结果。
1、 使用同一批次的ELISA试剂盒，确保稳定一致的结果
考虑 ELISA 试剂盒批间差异非常重要，尤其是在启动一个长期研究项目时。尽管许多知名的供应商都拥有内部对照，以避免随时间变化出现的数据偏移，但通过使用同一批次的试剂盒，可以尽量消除批次间的任何潜在差异。
确定整个项目需要多少套试剂盒，并订购相应数量，以保持稳定一致的结果。
2、 使用预包被的 ELISA 试剂盒，确保稳定一致的结果
如果可能，请购买所需的预包被 ELISA 试剂盒。预包被通常使用自动化仪器制造，从而减少了人工移液的变异性或误差。一旦孔板包被完，将进行验证测试以检测孔间和板间的任何差异，以确保预包被板的一致性。
Table 1. Inter-assay (between plates) and intra-assay (between wells) CV for Human IL-6 ELISA Kit (Cat. No. KHC0061).
孔板间精准度检测 Inter-assay precision 在5个不同的检测实验中，将样品检测8次，不同的检测实验中确定精准度 | 孔间精准度检测 Intra-assay precision 重复16次测定已知人IL-6浓度的样品，以确定孔间的精准度 | ||||||
参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 | 参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 |
平均数 (pg/mL) | 35.3 | 97.4 | 236.7 | 平均数(pg/mL) | 38.8 | 101.2 | 242.7 |
标准偏差 | 3.3 | 6.4 | 18.5 | 标准偏差 | 3.0 | 5.8 | 12.5 |
% 变异系数 | 9.3 | 6.5 | 7.8 | % 变异系数 | 7.7 | 5.7 | 5.1 |
3、 精简工作流程，确保稳定一致的结果
使用专为简化工作流程而设计的ELISA试剂盒。减少操作步骤和操作时间，并带来其它好处，例如：- 引入变量的机会更少（人为错误、缓冲液制备等） - 无需制备试剂 - 无需对标准品进行系列稀释（例如：一步法Instant ELISA） - 无需时常监测后续的添加操作步骤 | | |
减少操作步骤有助于节约时间和减少变化一步法 Instant ELISA 试剂盒，已为您完成了所有的制备工作。使用一步法Instant ELISA 试剂盒只有需 7 个工作步骤，而执行常规ELISA检测则需要17个步骤。因此，利用一步法Instant ELISA技术，可将实验的总体手动操作时间缩短至约 1 小时。 | ||
我们提供很多一步法Instant ELISA试剂盒，包括：- 人 IFN-γ - 人 IL-6 - 人 IL-10 - 人 TNF-α | ||
新一代免疫检测技术——ProQuantum免疫检测随着技术的发展，新一代ELISA平台可以提供更简化的工作流程。ProQuantum免疫检测技术是使用匹配的抗体对与qPCR 扩增技术相结合，以提高灵敏度、动态范围并减少样品的消耗。简化的工作流程消除了所有洗涤步骤，并且只需添加最少量的试剂。 | ||
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