RapiClear 组织透明  目录

1、与其它透明方法相比，RapiClear有什么优势？

使用有机溶剂(BABB/DISCO)对生物样品进行透明化处理时，对样品造成的损害却极大。在使用有机溶剂为透明液的情形下，样品本身所表达的荧光蛋白会遭到极大的破坏，在此同时，还会造成严重的自发荧光（autofluorescence）问题，使得免疫荧光染色的效果也会因为样本背景值大幅上升而大打折扣。

RapiClear透明液的作用方式与有机溶剂截然不同的。与水互溶的性质让RapiClear能够最大程度的维持样品的原貌，包括样品本身表现的荧光蛋白及免疫荧光染色的荧光讯号，都能很好的保留下来。而且由于RapiClear本身无腐蚀性且溶于水的性质，在取像镜头方面有更为广泛的选择，更适合用于进行高倍率时，样品内部精细构造的观察。

2、不同折射率的透明试剂对显微镜有什么要求？

不同折射率的透明试剂对显微镜并无特定型号的要求，所有共聚焦显微镜所配备的镜头皆可以使用。从分辨率好坏的角度来说，由优至劣的排列为油镜、甘油镜、硅油镜、水镜及空气镜，因此一般我们会建议老师挑选长工作距离的油镜、甘油镜、硅油镜、水镜进行观察，以获取高分辨率影像。

3、如果垫片选择不合适，会不会影响显微镜观察？

会。因为iSpacer垫片的厚度如果大于样品厚度，样品会漂浮而不影响confocal取像，反之，会将样品挤压变形。

4、小鼠脑组织透明一次所需要的试剂用量多大？

一般透明试剂的建议使用量至少要为样品体积的5-10倍。以厚度600μm的鼠脑切片为例，将切片置于含有2ml透明试剂的微量离心管中进行样品的透明。样品透明后置于适当厚度iSpacer垫片中，加入新鲜的RC（RapiClerar）透明试剂并封片，此时试剂用量依据选用垫片厚度而定。进行透明步骤所用的2mL试剂可循环再利用，但是一般不建议循环使用超过五次。

5、RapiClear能否用于硬组织如骨组织的透明？有什么注意事项？

可以。对于骨的透明，骨头样品在进行任何方式的切片步骤前，都需经过脱钙；可以选用RC152进行透明。

6、对于心脏组织透明，需要选用哪种透明试剂？

因为心脏自发性荧光特别强，建议用RC152 配合200~550μm的心脏切片进行抗体染色，会比较容易获取高清晰度的影像!

7、怎样处理放置在冷冻液里面的切片？

可以直接加透明试剂透明，建议最好洗掉里面的甘油，因为太多甘油可能会影响透明效果。

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