从患者的外周血中分离富集高纯度的Treg细胞，在CD3和CD28抗体的刺激下体外培养，伴随适当剂量的IL-2，可以扩增得到大量的Treg细胞，并且在流式分析检测后，转移至患者体内，有可能在体内发挥良好的免疫调节作用。

人Treg细胞的表型为CD4+CD25high并高表达转录因子FoxP3，CD127的表达与FoxP3的表达呈负相关，去除CD4⁺CD25^high细胞群内的CD127^high细胞可富集高表达FoxP3以及具有高扩增潜能的Treg亚型。通过使用红细胞裂解液裂解红细胞、羟乙基淀粉沉降红细胞或者用密度梯度离心管（ #601115/601150）和淋巴细胞分离液（#1114546）进行密度梯度离心去除外周血中的红细胞，从而获得MNC或者PBMC。再利用免疫磁珠分选试剂盒（#18063）等分选高纯度的Treg细胞。

分离得到的Treg可以通过特异性标记CD4\CD25\CD127或者胞内转录因子FoxP3抗体（#17-4776-41）进行流式鉴定，从而确定分选纯度。由于FoxP3是胞内表达，因此检测时，需要进行破膜处理。FoxP3 / Transcription Factor Staining Buffer Set（#00-5523-00）专利配方设计和优化，可使用抗体对转录因子和核蛋白（例如 FoxP3 和 Ki-67）以及细胞因子和趋化因子进行核内染色。

RPMI 1640培养基（#11875093）中添加抗CD3（#16-0037-81）和CD28（#16-0289-81）单克隆抗体或者CD3/CD28激活剂（#10971）和人细胞因子IL-2（#200-02-10），添加人血清对人Treg进行体外扩增。ImmunoCult-XF（#10981）是一款无异种动物源的T细胞的扩增培养基，可用于Treg细胞的培养。另外，由于分离的Treg细胞中不可避免的混有一定量的应答T细胞，因此通常在培养Treg的时候加入抑制性药物雷帕霉素（RAPA）用以进行选择性扩增。RAPA能够抑制应答T细胞的扩增，从而提高体外扩增Treg的纯度。

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Treg细胞经CD3\CD28刺激活化后能够抑制应答细胞CD4⁺CD25^-( Tresp）和CD8⁺ T细胞的活化和增殖。Treg一旦被活化，其免疫抑制作用即为非抗原特异性，并且这种免疫抑制性不具有MHC限制性，能够抑制同种同型或同种异型CD4⁺CD25^-（Tresp）和CD8⁺T细胞的活化、增殖。除此之外，Treg还能对NK细胞的增殖、细胞因子分泌、单核/巨噬细胞、树突状细胞、B 细胞等免疫活性细胞起到抑制作用。 将分离的Treg细胞与CFSE（#65-0840-85）标记的应答细胞（Tresp）或者CD8T细胞共培养，流式检测CFSE的荧光强度。通过CFSE的荧光强度确定细胞的增殖情况。

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培养的Treg细胞，可以用无血清冻存液Cryostor CS10（#210102）进行低温冻存。如果进行短距离运输，还可使用HypoThermosol FRS（#07934）进行4℃保存，无需担心由于冻存复苏影响细胞活力。