人胚胎干细胞 hES实验方法与知识汇总
人胚胎干细胞(hESCs)具有在体外自我更新扩增和分化为多种类型细胞的潜能,可为再生医学的替代疗法提供充足的细胞来源。
STEMdiff™脑类器官试剂盒为无血清培养系统,设计用于从人胚胎干细胞(ES)和诱导多能干细胞(iPS)生成脑类器官,基于MA Lancaster和JA Knoblich8发表的配方研发。培养40天后,这些脑类器官具有层次分明的祖细胞群,并产生成熟神经元,与在早期发育中人脑皮质层的观察结果相符。
无滋养层无血清的培养条件下,多能干细胞的需要有特殊的基质胶促进贴壁和生长。基质胶铺的好坏对hPSC培养有很大的影响。
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用于鉴定干细胞的方法有多种:传统AP 染色鉴定形态、核酸方法鉴定(qPCR 检测基因表达、染色体核型分析、转座因子分析、DNA 甲基化分析),还有基于抗体的蛋白鉴定方法(如免疫荧光、免疫印迹、流式细胞术等应用)。
在多能干细胞培养基中生长的hPSC,当集落变得较大、中心变得密集和明亮(对比其边缘),而相邻的集落开始融合时,这时可进行细胞传代。
当细胞扩增到一定数量以后,建议将其冻存起来进行后续的研究。目前用的最多的冻存液为10%FBS+DMSO+培养基冻存,但是血清的存在可能会影响后期细胞的应用。本文采用无血清冻存液,分别采用团块形式和单细胞形式进行hPSC的冻存。
类器官这项技术自问世起,就快速且广泛的应用于多种方面,包括基础研究、转化医学和工业。类器官相关的文献也占据了各大高影响因子的期刊封面,更在2017年被Nature评为Method of the Year 2017。
脑类器官是源于人多能干细胞(hPSC)的三维体外培养系统,这些系统再现了发育中人类大脑的发育过程和组织。它们为人神经系统所特有的神经发育和疾病过程的研究提供了一个具生理相关性的体外模型。它们为人神经系统所特有的神经发育和疾病过程的研究提供了一个具生理相关性的体外模型。在研究人类大脑发育和神经系统疾病如自闭症、精神分裂症或由寨卡病毒感染而引起的脑缺陷,神经类器官发挥重要的作用。
肝脏是一个重要的器官,参与广泛的过程,如解毒,蛋白质合成,代谢和激素的产生。尽管在体内具有惊人的再生能力,但是在体外,肝细胞的扩增仍然是一个挑战。肝上皮细胞作为器官的生长为研究人员提供了稳定的肝细胞群,可用于肝脏生物学、疾病建模和毒性筛选等多个领域的研究。
最近在分离上皮祖细胞和基质细胞以及确定对肺发育重要的生态因子上取得的进展,已经导致建立了一个体外的3D肺组织培养细胞。
胃类器官
类器官属于三维(3D)细胞培养物,包含其代表器官的一些关键特性。此类体外培养系统包括一个自我更新干细胞群,可分化为多个器官器官特异性的细胞类型,与对应的器官拥有类似的空间组织并能够重现对应器官的部分功能,从而提供一个高度生理相关系统.
Matrigel作为一种基质胶,经常被用于各种细胞的培养以及类器官的形成,但Matrigel种类繁多,如何正确选择一款Matrigel是解决细胞饿殍用的关键一步。为了更有效地帮助大家了解Matrigel产品、改善产品选择流程,同时解决可能出现的问题,本文特地整理了一系列常见问题解答(FAQ)。
还在为取材困难而无法建立疾病模型烦恼吗?利用Episomal重编程系统可将10 mL外周血诱导生成无外源基因插入的hiPSCs,为您轻松建立理想的疾病模型.